CES - Revista Veterinaria Julio - Diciembre 2007 - (Page 15) production rates were significantly higher (P<0.05) in oocytes without serum-matured than oocytes serum-matured (34.8 ± 3.70% vs. 24.5 ± 3.12%, respectively). We concluded that the presence of FCS in medium during bovine oocyte in vitro maturation, can affect mitochondrial activity and embryo in vitro development. Key words Oocytes, in vitro embryo production, fetal calf serum, mitochondrial activity. Introducción La suplementación de la maduración in vitro de oocitos bovinos con suero fetal bovino y otros sueros, es una práctica muy extendida dentro de los protocolos de producción in vitro de embriones bovinos (1, 2, 3). El suero fetal es en general considerado como una fuente de nitrógeno para los embriones preimplantatorios (4), sin embargo éste contiene un amplio grupo de moléculas definidas y no definidas que ejercen diversos efectos sobre el desarrollo in vitro de los embriones a través de nutrientes, hormonas, quelantes de metales pesados y factores de crecimiento, como algunos de sus principales componentes (5, 6). Dichos efectos han sido caracterizados desde benéficos en la competencia para el desarrollo de oocitos y embriones por los aportes de las moléculas mencionadas, hasta contraproducentes para el desarrollo in vitro, la morfología embrionaria, la criótolerancia, la actividad mitocondrial, la expresión génica, y el desarrollo fetal y postnatal en las crías resultantes de los embriones transferidos (7-15). A nivel celular se ha fijado la atención en la incorporación de lípidos desde el suero como posible causante de alteraciones en el desarrollo embrionario, pues la presencia de suero en el medio de cultivo ha sido referida como responsable de una excesiva acumulación de lípidos en oocitos y embriones (16-19) , lo cual se manifiesta por la apariencia oscura de su citoplasma (10), y se ha relacionado con bajas tasas de producción de blastocistos (20, 21). El mecanismo por el cual se da dicha acumulación en embriones bovinos aún no ha sido aclarado, sin embargo se conoce que células en cultivo pueden tomar ácidos grasos, fosfolípidos y triglicéridos desde medios suplementados con suero y que la mayoría de los lípidos son derivados de triglicéridos contenidos en lipoproteínas séricas (6, 13). Se ha sugerido que la excesiva acumulación de lípidos citoplasmáticos en oocitos y embriones conduce a cambios en su contenido de lípidos y en su composición de ácidos grasos, lo cual puede estar asociado a trastornos en el metabolismo mitocondrial (9, 13) pues se conoce que embriones cultivados en medios suplementados con suero, poseen mitocondrias inmaduras en comparación a aquellos cultivados en medios libres de suero (13). Estos hallazgos revisten importancia ya que observaciones indican que las mitocondrias son funcionalmente trascendentes para los oocitos y el desarrollo embrionario temprano, pues se sugiere una relación funcional entre la fosforilación oxidativa, la producción de ATP y el desarrollo embrionario (22-29), y se ha propuesto que la pérdida de actividad mitocondrial en oocitos puede contribuir al bajo desarrollo embrionario durante la producción in vitro (3034) y a las bajas tasas de preñez post-transferencia (35,36). De acuerdo a éste panorama, para esta investigación se plantea como hipótesis, que las fallas en el desarrollo embrionario in vitro de oocitos bovinos pueden ser el resultado de alteraciones mitocondriales representadas por descensos en las proporciones de mitocondrias de alta actividad, causadas por la suplementación de la maduración in vitro con suero fetal bovino. Por lo cual cobra gran importancia la determinación de los niveles de actividad mitocondrial en oocitos maduros destinados para la fertilización y el desarrollo in vitro. Materiales y métodos Recolección de ovarios y complejos cúmulus-oocito Los oocitos bovinos fueron recuperados desde ovarios de hembras provenientes de la planta de faenado local, transportados en solución salina (NaCl 0,9%) a 38 ºC, y procesados en el laboratorio dentro de las tres horas posteriores a la recolección. Los folículos entre 2 y 6 mm fueron aspirados usando una jeringa de 5 ml con una aguja calibre 18. Los complejos cúmulus-oocito (CCOs) y el fluido folicular recuperados fueron puestos en tubos cónicos plásticos de 50 ml, dejándolos sedimentar durante 15 minutos a 37 °C para realizar la recuperación posterior de la fracción precipitada, desde la cual se seleccionaron solamente los complejos con características de ooplasma homogéneo, mínimo tres capas compactas de células 15 Revista CES / Medicina Veterinaria y Zootecnia / Volumen 2 / Número 2 / Julio – Diciembre de 2007 / ISSN 1900-9607
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