LCGC en francais - June 2008 - (Page 18)

PROBLEMES TECHNIQUES EN LC les variations de colonne résultant d’une différence dans la production sont la source des problèmes de temps de rétention, vous devriez observer un changement brutal de la rétention en changeant la colonne. Revérifiez les changements observés en utilisant chaque colonne au moins de fois dans une série d’expériences. Par exemple, colonne 1 puis colonne 2, puis colonne 1, puis colonne 2, etc… Vous devriez obtenir des résultats reproductibles sur chaque colonne et des variations reproductibles entre les colonnes si le remplissage est la source de votre problème. plus de 500 injections est raisonnable. Si votre colonne dure moins de 500 injections, vous devez vous interroger sur la cause et si possible la corriger. Changements de la température de colonne: Les variations de température sont une source fréquente de variation des temps de rétention si la colonne n’est pas placée dans un four. Pour les séparations en phase inverse en mode isocratique, j’utilise la règle empirique qui associe un changement de 1 °C de la température de la colonne à des variations de 2% dans les temps de rétention. L’influence de la température en mode gradient sera moins Si la cause du problème ne peut être trouvée ou si une fois trouvée, elle ne peut être corrigée, alors un ajustement du débit est justifié. Une deuxième source de variations liées à la colonne est due au vieillissement de la colonne. Une fois encore, c’est moins un problème avec les colonnes deType-A qu’avec celles de Type-B, mais ça peut arriver. Les temps de rétention peuvent dériver pendant les premières injections, ce qui est assez courant et je ne m’en inquièterais pas — faites simplement quelques injections d’ « amorçage » avant d’utiliser la méthode. Si la rétention dérive sur des dizaines ou des centaines d’échantillons, il se peut que les variations de la chimie de la colonne interviennent lors de la mise en œuvre de la méthode. Ceci peut résulter de l’accumulation de contaminations sur la colonne. Une purge avec 25 à 50 mL d’un éluant fort, comme 100% acétonitrile, peut suffire à régénérer la colonne. Si la phase mobile est particulièrement agressive, la colonne peut être détériorée de manière irréversible. Par exemple, à pH 2, les greffons ont tendance à se cliver de la phase de silice, et à pH 8, la silice elle-même peut être dissoute. Si le pH de votre méthode est en dehors de ces limites, vous devez vous attendre à des durées de vie de colonnes plus courtes (accompagnées d’un changement dans la rétention) sauf si vous utilisez une colonne spécialement conçue pour les pH extrêmes. Finalement, rappelez-vous que les colonnes doivent être considérées comme des consommables — elles ont une durée de vie déterminée. Selon mon expérience, une colonne qui a subi 1000–2000 injections a rendu de bons et loyaux services et dans certains cas, une survie de la colonne à 18 importante. Un changement de température dans des méthodes isocratiques et en gradient peut provoquer un changement de sélectivité ou un espacement de pics, spécialement si l’échantillon contient des composés ioniques. Il devrait être de pratique courante d’utiliser un four chromatographique dans toutes les méthodes — utiliser une méthode indiquant «température ambiante» permet juste de s’attirer des problèmes. Variations potentielles dans l’instrumentation Si vous êtes sûr que la méthode fonctionne convenablement, c’est-à-dire phase mobile correcte, bonne colonne, contrôle de température adéquat, envisagez que le système LC soit la source du problème. Vous pouvez aussi choisir de d’abord vérifier rapidement le système pour éliminer les problèmes évidents avant d’envisager des problèmes d’origine chimique. C’est comme vous voulez. Les quatre premiers problèmes cités dans le Tableau 1 sont rencontrés régulièrement par les utilisateurs en l’absence d’une bonne maintenance préventive de routine. Dans tous les cas, le problème conduira à un débit plus faible et donc des temps de rétention plus importants. Si vous avez des temps de rétention plus faibles, n’effectuez pas ces vérifications. Fuites: Les fuites peuvent habituellement être détectées en vérifiant la présence de liquide ou de résidus de tampon à tous les raccords. Pour les fuites difficiles à localiser, un petit morceau de papier thermosensible peut être placé contre le raccord suspect. Ce papier se décolore très facilement en présence de solvant organique et peut être utilisé pour détecter des fuites invisibles à l’oeil nu. Resserrez doucement les raccords desserrés pour éliminer la fuite — si ça ne sert à rien, remplacez le raccord. Bulles dans la pompe: La présence de bulles va conduire à une chute du débit de la pompe accompagnée par des fluctuations de pression. Dégazez minutieusement la phase mobile et purgez la pompe pour éliminer les bulles et les empêcher de revenir. Le dégazage de la phase mobile est le moyen le plus efficace d’améliorer la fiabilité du système LC. Heureusement la plupart des systèmes de LC récents comporte un dégazage intégré qui dégaze automatiquement le solvant avant utilisation. Joint de pompe défectueux: Un problème de joint est le résultat d’une utilisation normale des joints de pompe avec le temps. Dans la plupart des applications, les joints durent entre 6 mois et un an, mais dans certaines conditions, leur durée de vie peut être amoindrie. Je recommande de changer les joints de pompe tous les 6 mois au cours de la maintenance semestrielle dans les laboratoires où la LC est utilisée quotidiennement. Si elle est seulement utilisée occasionnellement, alors un remplacement annuel des joints de pompe est suffisant. C’est un de ces cas où une maintenance préventive est plus prudente qu’attendre que le joint soit défectueux. L’usure du joint est habituellement accompagnée du relargage de particules provenant de ce joint qui peuvent remonter pour boucher les frittés et abîmer la colonne. Des joints très abîmés peuvent conduire à une fuite de la phase mobile par l’orifice du drain juste derrière le clapet d’entrée. Si vous ne changez pas vos joints de pompe régulièrement, alors vous pouvez procéder de la même façon qu’un de mes amis avec ses cordes de guitare — si vous ne rappelez pas la dernière fois que vous les avez changés alors c’est sûrement le moment. Clapets défectueux: Les clapets peuvent ou non être la cause de problèmes récurrents, en fonction des conditions de la méthode et de la configuration de l’appareillage. Un clapet qui colle ou qui fuit peut conduire à des débits plus faibles que ceux attendus. Avec les clapets à bille conventionnels, les phases mobiles à base d’acétonitrile semblent donner plus de LC•GC en français juin 2008

Table des matières de la publication LCGC en francais - June 2008

LCGC en francais - Juin 2008
Table des matières
De l’éditrice
Introduction de l’AfSep
Performances Comparées de Différents Supports Polairesen vue de l’Analyse d’Herbicides Organophosphorés par Chromatograhie d’Interactions Hydrophiles
Problemes Techniques en LC
Connexions en CPG
Corrélation de Cinq Tests Généraux Représentée par ACP et CAH pour la Caractérisation des Phases Stationnaires de CLPI
Caractérisation de Polymères Sous Forme d’Étoiles Chimiques par Électrophorèse Capillaire
Revue de Forum LABO & Biotech 2008
Produits

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