LCGC en francais - June 2008 - (Page 28)

Tchapla et al. Table 2: Caractéristiques physiques des phases stationnaires de CLPI représentatives des différentes structures moléculaires de surface classiquement disponibles. Uptisphere HDO HSC NEC ODB PLP RP38 (prototype) Strategy C18(2) Strategy C18(3) Strategy RP TF Nature de la greffe C18 C18 C18 C18 Groupe polaire inserré C14 C18 C18 C18 C18 Structure de la greffe monocouche monocouche monocouche monocouche monocouche monocouche monocouche monocouche monocouche Polycouche verticale Diamètre de pores 120 Å 120 Å 120 Å 120 Å 120 Å 100 Å 100 Å 100 Å 100 Å 120 Å Recouvrement total Oui (mixte) Oui (multi étape) Non Oui Oui Non Oui (multi étape) Oui (multi étape) Oui (mixte) Oui %C 17 20 16 18 14 16 19 22 16 14 mesurées pour chacun des 5 tests retenus).5 Une analyse par classification ascendante hiérarchique (CAH) a été aussi effectuée à partir des données d’ACP représentant au minimum 85% de la variabilité totale de «l’échantillon» étudié.26 Elle a été réalisée à partir du protocole développé, pour comparer les résultats des tests de Tanaka et al et Stella et al sur un lot de vingt sept silices greffées principalement traitées pour l'analyse de solutés basiques.26 Le traitement en CAH permet de regrouper les phases stationnaires par groupes de propriété de séparation analogue (clusterisation) et éventuellement de les matérialiser sur le diagramme d’ACP. Ces traitements statistiques ont été appliqués aux résultats acquis sur les 23 phases stationnaires différentes (colonnes neuves de même géométrie) décrites dans le Tableau 1. Toutes ces phases sont des silices greffées octadécyle, exceptées: Synergi MaxRP (à haute densité de greffage de groupements dodécyle: C12), Uptisphere PLP (à groupement polaire inséré), et Uptisphere RP38 (greffe C14). En plus des 13 silices greffées choisies, 10 phases Uptisphere ont été ajoutées à cette étude. Ce choix s'est imposé puisqu'elles ont été primitivement synthétisées pour correspondre aux différentes zones définies par le test de Lesellier et Tchapla14,15 qui classe les phases dans un plan selon deux critères : les sélectivités stérique et polaire. Leurs caractéristiques sont résumées dans le Tableau 2. Par exemple, Uptisphere HSC a été choisie pour représenter les silices greffées par une couche mono-moléculaire de chaînes octadecyle à haute densité de greffage et Uptisphere NEC et RP38 pour les silices greffées possédant une grande activité de silanols résiduels. Cette démarche nous a permis d’évaluer comment le regroupement des données des 5 tests met réellement en évidence les relations entre la structure moléculaire de la phase stationnaire et les propriétés séparatives différentes de celle-ci, avant de l’utiliser pour tirer des conclusions générales sur un lot beaucoup plus élargi de phases stationnaires. donneraient 48 vecteurs sur le diagramme d’ACP final, le rendant ainsi très difficilement interprétable. Après avoir analysé les résultats des ACP de l’ensemble des paramètres chromatographiques relatifs à chaque test, nous avons réduit les données pour chacun d’entre eux afin de ne conserver que celles qui donnaient des informations pertinentes et non redondantes. Résultats et Discussion Après examen séparé des ACP de chacun des tests, seize critères (variables) ont été conservés: • BPA/DPPH, kBPA et AsBPA pour le test d’Engelhardt et al. • BaP/TBN et kBaP pour le test de Sander et Wise • tri/o-ter, CH2, caf/phe, kpent et kcaf pour le test de Tanaka et al. • trans/zéa, cis/ trans et k trans pour le test de Lesellier et al. • stat, CH3, 2–5phe/phe pour le test des phénols Parmi ces seize variables, certaines donnent à priori des informations identiques sur les caractéristiques chromatographiques des phases stationnaires. Ainsi la sélectivité polaire est caractérisée par BPA/DPPH (test d’Engelhardt et al.), caf/phe (test de Tanaka et al.) et trans/zéa (test de Lesellier et al.); la sélectivité de résistance stérique par TBN/BaP (test de Sander et Wise), tri/o-ter (test de Tanaka et al.) et cis/ trans (test de Lesellier et al.); la rétention hydrophobe par kpent (test de Tanaka et al.) et k trans (test de Lesellier et al.). Enfin la sélectivité hydrophobe par CH2 (test de Tanaka et al) et CH3 (test des phénols). Les seize variables choisies ont été traitées en composantes principales. Nous avons pu constater sur le diagramme ACP résultant que les trois paramètres de résistance stérique ( tri/o-ter, BaP/TBN et cis/ trans) sont bien corrélés. Nous avons donc choisi de conserver la sélectivité stérique médiane entre les trois: tri/o-ter. Du point de vue expérimental cela évite d’utiliser des sondes moléculaires cancérigènes ou des sondes à préparer extratemporellement pour évaluer cette propriété. On peut donc s’affranchir des résultats des tests de Sander et Wise et de Lesellier et al. en traitant les seules données du test de Tanaka et al. Nous avons vérifié que les trois données en questions étaient bien linéairement corrélées deux à deux, comme décrit dans les travaux précédemment publiés par Claessens et al.,8 Euerby et al.11,12 ou Neue et al.27 qui justifient ainsi les réductions de données sans perdre d’information dans ce genre de traitement mathématique. Les vecteurs correspondant aux paramètres de sélectivité polaire BPA/DPPH (test d’Engelhardt et al.) et trans/zéa (test de Lesellier et Tchapla) sont anti-corrélés alors que la sélectivité polaire exprimée par caf/phe (test de Tanaka et al.) est orthogonale. Cela peut être LC•GC en français juin 2008 Stratégie Adoptée L’ensemble des tests a été effectué au laboratoire sur les 23 colonnes sélectionnées (temp. 30 ºC) excepté pour le test de Lesellier et al où les trois données sont bibliographiques.14–16 Pour chacun des 5 tests retenus, nous avons traité en analyse statistique multi variables l’ensemble des données expérimentales acquises, à savoir le facteur de rétention, l’asymétrie de pic et les différentes sélectivités pour chacune des paires successives de solutés. Au total, on dénombre 48 paramètres (facteurs de rétention, sélectivités et asymétries) qui traités sans réduction 28

Table des matières de la publication LCGC en francais - June 2008

LCGC en francais - Juin 2008
Table des matières
De l’éditrice
Introduction de l’AfSep
Performances Comparées de Différents Supports Polairesen vue de l’Analyse d’Herbicides Organophosphorés par Chromatograhie d’Interactions Hydrophiles
Problemes Techniques en LC
Connexions en CPG
Corrélation de Cinq Tests Généraux Représentée par ACP et CAH pour la Caractérisation des Phases Stationnaires de CLPI
Caractérisation de Polymères Sous Forme d’Étoiles Chimiques par Électrophorèse Capillaire
Revue de Forum LABO & Biotech 2008
Produits

LCGC en francais - June 2008

https://www.nxtbook.com/nxtbooks/advanstaruk/lcgc-ef0608
https://www.nxtbookmedia.com