LCGC en francais - June 2008 - (Page 44)

APPLICATION NOTE Détermination Simultanée des Anions et Cations en une Seule Analyse à l’aide d’un Système de CLHP Classique Nicholas Santiago, Ian Acworth et John Waraska, ESA Biosciences Inc., Chelmsford, Massachusetts, USA. Introduction L’analyse quantitative des anions et des cations constitue une part importante du développement de médicaments et de leur contrôle qualité. Elle englobe la confirmation de la stoechiométrie, l’identification du contre-ion mais aussi de l’entité chimique, ainsi que la détection des impuretés ioniques. La chromatographie d’échange d’ions (IC) est souvent utilisée pour ce type d’analyses, mais elle nécessite l’utilisation de nombreuses colonnes et suppresseurs d’ions pour analyser toute la gamme des analytes d’intérêt. De plus, des approches distinct doivent être mises en oeuvre selon que l’on analyse des anions ou des cations. Dans cette étude, la chromatographie d’interaction hydrophile (HILIC) sur une phase stationnaire de type polymère zwitterionique, couplée à une détection d’aérosols chargés (CAD) a été utilisée pour la détermination simultanée de plusieurs anions et cations. Les conditions de phase mobile telles que le pH, la force ionique et la composition en modificateur organique peuvent être modifiées pour réaliser facilement une séparation donnée.1 Figure 2: Courbes d’étalonnage. 14000000 Réponse (aire) 12000000 10000000 8000000 6000000 4000000 2000000 0 0 500 1000 1500 2000 2500 3000 3500 Quantité injectés (ng) R2 R2 R2 R2 0.9999 0.9998 0.9999 0.9997 Nitrate Chlorure Sodium Phosphat Résultats L’analyse par HILIC–CAD permet la quantification simultanée de plusieurs anions et cations (Figure 1). Les courbes d’étalonnage montrent une bonne linéarité sur une gamme dynamique d’au moins 3 ordres de grandeur (Figure 2). Les limites de détection varient de 10 ng (chlorure) à 100 ng (phosphate), injectés sur la colonne. Précision de la mesure: %CV 1.0% pour tous les analytes. Linéarité sur 5 niveaux de concentration: R2 0.9997. Répétabilité: %CV 3.0% pour tous les analytes; Reproductibilité (calculée sur plusieurs jours): %CV 5.0% pour tous les analytes. Exactitude: Taux de recouvrement moyen 100–105% pour tous les analytes. Instrumentation Le système HPLC est constitué d’une pompe modèle 584, d’un passeur d’échantillons modèle 540, d’un détecteur Corona CAD plus et est piloté par le logiciel EZ Chrom Elite (ESA Biosciences Inc.). Conditions Expérimentales La séparation des ions est réalisée sur une colonne ZIC-pHILIC (4.6 150 mm, 5 µm, SeQuant Umea, Suède) à 30 ºC à l’aide d’une phase mobile 75:25 (v/v) acétonitrile/100 mM acétate d’ammonium (pH 7,0) utilisée en mode isocratique à 1,0 mL/min. Les analytes (chlorure d’ammonium, nitrate d’ammonium, phosphate d’ammonium et acétate de sodium) sont dilués dans la phase mobile et des injections de 10 µL sont effectuées. Tous les échantillons sont préparés dans des récipients en matériaux plastiques pour éviter la contamination par des ions issus du relargage de la verrerie et des flacons du passeur d’échantillons. Conclusions L’analyse par HILIC–CAD représente une alternative intéressante à la chromatographie ionique couplée à une détection conductimétrique pour l’analyse des ions. Cette approche permet de quantifier simultanément plusieurs anions et cations, sans avoir recours à des systèmes analytiques et des conditions différents. Les conditions peuvent être modifiées pour déterminer à la fois l’ion actif et son contre-ion dans le même échantillon.2 L’analyse par HILIC–CAD est totalement compatible avec la LC–MS, ce qui permet la réalisation en parallèle d’une double détection MS et CAD. Figure 1: Analyse de plusieurs ions (1 µg nitrate d’ammonium et chlorure d’ammonium; 2 µg d’acétate de sodium; 3 µg de phosphate d’ammonium phosphate, injectés sur la colonne). 500 400 mV 300 200 100 0.0 2.0 4.0 6.0 8.0 10.0 12.0 14.0 Nitrat: NO3 Sodium: Chlorure: Na Cl Phosphat: e:PO4 3 Références 1. 2. 3. Donald S. Risley et Brian W. Pack. LC•GC N. Am., 24(8), 776–785 (2006). Application Note: Ion Analysis in Pharmaceuticals, 70-8187P www.esainc.com/ion_analysis Corona, CAD et ESA sont des marques déposées de ESA Biosciences Inc. ESA Biosciences Inc. Temps (min) 22 Alpha Road, Chelmsford, Massachusetts 01824, USA tel. +1 978 250 7000 fax +1 978 250 7090 E-mail: info@esainc.com Website: www.esainc.com LC•GC en français juin 2008 44 http://www.esainc.com/ion_analysis http://www.esainc.com http://www.esainc.com

Table des matières de la publication LCGC en francais - June 2008

LCGC en francais - Juin 2008
Table des matières
De l’éditrice
Introduction de l’AfSep
Performances Comparées de Différents Supports Polairesen vue de l’Analyse d’Herbicides Organophosphorés par Chromatograhie d’Interactions Hydrophiles
Problemes Techniques en LC
Connexions en CPG
Corrélation de Cinq Tests Généraux Représentée par ACP et CAH pour la Caractérisation des Phases Stationnaires de CLPI
Caractérisation de Polymères Sous Forme d’Étoiles Chimiques par Électrophorèse Capillaire
Revue de Forum LABO & Biotech 2008
Produits

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