LCGC en francais - June 2008 - (Page 45)

APPLICATION NOTE Caractérisation Automatisée de Macromolécules avec une Pompe HPLC Binaire Nicolas Mignard, Wyatt Technology France, Toulouse, France. Une pompe binaire standard HPLC peut être utilisée pour préparer, mélanger et injecter un échantillon à différentes concentrations afin de réaliser un diagramme de Zimm. L’utilisation d’un flux continu automatisé simplifie grandement les manipulations et permet d’obtenir des résultats de diffusion de lumière fiables et rapides. Historiquement ce type d’expérience était réalisé avec un pousse-seringue et au moins 5 concentrations différentes du même échantillon. Les solutions étaient préparées préalablement et injectées une après l’autre grâce au pousse-seringue ce qui nécessitait de nombreuses manipulations, les concentrations devant être connues à priori et entrées manuellement. De plus des microbulles d’air venaient souvent perturber le signal de diffusion de lumière. Maintenant un réfractomètre Optilab rEX peut être ajouté en ligne au système de dilution réalisé par la pompe HPLC afin de déterminer automatiquement les concentrations durant l’expérience. Dans cet exemple, un dextran de masse molaire d’environ 545 kg/mol est dissout à la concentration de 2,5 mg/mL dans le tampon et mis dans le réservoir «A». Du tampon seul est mis dans le réservoir «B». Sont connectés en ligne la pompe, un filtre à faible volume mort, le détecteur à diffusion de lumière et le réfractomètre. Le débit est fixé à 1 mL/mn et la pompe est programmée pour délivrer une série de concentration de 0% de A à 100% de A puis revenir à 0%. Chaque concentration est maintenue pendant 3 mn pour un total de 3 mL par étape afin d’obtenir un plateau de concentration identique dans les 2 détecteurs. Les données sont collectées et traitées par le logiciel ASTRA. Pour cet exemple, les valeurs trouvées sont de 547 ( 1,9) kg/mol pour la masse molaire, 23,1 ( 0,5) nm pour le rayon de giration et un second coefficient du viriel (A2 ou B22) de 1,27 ( 0,02) 10 4 mol.mL.g 2. Comme on peut le voir sur les deux graphiques à droite, cette technique automatisée de préparation et d’injection d’échantillon ainsi que de mesure de concentration donne des acquisitions de données très bonnes, permettant une détection précise de la masse molaire de la taille et du second coefficient du viriel en moins de trente minutes. Figure 1: Préparation, mélange et injection d’un dextran avec une pompe binaire. En rouge le tracé de la diffusion de lumière statique effectué par un DAWN HELEOS. En bleue, le tracé de la concentration effectué par un réfractomètre Optilab rEX. Le temps d’expérience est d’environ 30 min. 2.6 10 K* c/R(theta) 2.4 10 2.2 10 2.0 10 6 6 6 6 0.5 0.0 sin2(theta/2) 0.5 kc Figure 2: Graphe de Zimm résultant de l’utilisation d’une pompe binaire. Les données ont été collectées et traitées avec le logiciel ASTRA. La qualité des données équivaut ou même sont supérieurs à celles obtenues avec l’utilisation d’une pompe seringue. Rayleigh ratio (1/cm) 1 10 4 3 10 4 2 10 5 10 6 4 1 10 4 0 25 30 35 40 Time (min) 45 0 Wyatt Technology France 45 rue Adolphe Coll FR-31300 Toulouse, France tél. +33 5 34 55 99 28 téléfax +33 5 67 20 64 74 E-mail: wft@wyatt.com Website: www.wyatt.com LC•GC en français juin 2008 45 Differential refractive index http://www.wyatt.com http://www.wyatt.com

Table des matières de la publication LCGC en francais - June 2008

LCGC en francais - Juin 2008
Table des matières
De l’éditrice
Introduction de l’AfSep
Performances Comparées de Différents Supports Polairesen vue de l’Analyse d’Herbicides Organophosphorés par Chromatograhie d’Interactions Hydrophiles
Problemes Techniques en LC
Connexions en CPG
Corrélation de Cinq Tests Généraux Représentée par ACP et CAH pour la Caractérisation des Phases Stationnaires de CLPI
Caractérisation de Polymères Sous Forme d’Étoiles Chimiques par Électrophorèse Capillaire
Revue de Forum LABO & Biotech 2008
Produits

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