LCGC ADS - July 2009 - (Page 12)

CE-STRÖMUNGEN Anwendung der Kapillarelektrophorese zur Freigabe und Charakterisierung von Impfstoffen Brian K. Nunnally, Wyeth, Sanford, North Carolina, USA. Die Kapillarelektrophorese (CE) wird in zunehmendem Maße in der Impfstoffanalytik eingesetzt. Die Anwendungen beinhalten Impfstoffquantifizierung, Reinheitsbestimmung, Prozessüberwachung, Charakterisierung und Nukleinsäureanalytik. Die CE wurde eingesetzt, da sie Vorteile gegenüber anderen Techniken besitzt. Impfstoffhersteller wie Sanofi-Aventis, Merck und Wyeth untersuchen engagiert den Einsatz der CE für die Impfstoffanalytik. Obwohl die CE als ausgereifte Methode angesehen werden kann, sind ihre Anwendungen zur Freigabe und Charakterisierung von Impfstoffen beschränkt. Es ist schwierig, einwandfrei festzustellen, ob der Einsatz sich ausweitet, da es immer noch nur eine geringe Anzahl von Publikationen gibt, aber angesichts der vorhandenen Vorteile der CE und des Bedarfs an besseren analytischen Techniken zur Impfstoffanalytik, müssen die Einsätze steigen. Dieser Beitrag zeigt einige der CE-Anwendungen in der Impfstoffanalytik. Was ist ein Impfstoff? Was unterscheidet ihn von einem therapeutischen Protein? Eine breite Auswahl von Antigenen kann als Impfstofftherapeutika eingesetzt werden. Die ersten Impfstoffe verwendeten abgeschwächte lebende oder abgetötete Mikroorganismen. Im Laufe der Zeit konnte ein Schutz durch den Einsatz von Mikroorganismusteilen wie Proteine oder Polysaccharide erreicht werden. Für die Herstellung von Impfstoffen wird eine Vielzahl von Technologien genutzt, einschließlich Konjugation von Polysaccharid oder Peptiden zu einem Transportprotein, rekombinante Expression und rekombinante Vektoren. Ein ProteinImpfstoff (oder der Proteinanteil eines Impfstoffes) ist im Wesentlichen dasselbe, vom analytischen Standpunkt, wie ein therapeutisches Protein. Warum der Einsatz von CE in der Impfstoffanalytik? Bezogen auf die Anzahl publizierter Artikel und der gehaltenen 12 wissenschaftlichen Vorträge nimmt der Einsatz von CE in der Impfstoffanalytik zu. Interessierte Leser werden zu diesem Thema auf einen umfassenderen Übersichtsartikel verwiesen.1 Zur Analyse von Biotherapeutika2–3 ist die CE eine bewährte Technik, weil ihre Vorteile (Schnelligkeit, geringer Arbeitsaufwand und verbesserte Reproduzierbarkeit/ Automatisierung) dazu beigetragen haben, die Natriumdodecylsulfat-PolyacrylamidGelelektrophorese-Analysen (SDSPAGE) ebenso wie die Gels zur isoelektrische Fokussierung (IEF) erfolgreich zu verdrängen. Die CE wurde benutzt, eine Vielzahl von Techniken zur Impfstoffanalytik zu ersetzen. Die traditionell in der Impfstoffanalytik angewandten Methoden beinhalten kolorimetrische Untersuchungen zur Konzentrationsbestimmung, SDS-PAGE, HochleistungsFlüssigchromatographie (HPLC) für Reinheits- und Verunreinigungsanalysen und IEF zur Bestimmung des isoelektrischen Punktes (IEP). Die Methoden leiden unter vielen Problemen einschließlich Präzision (mit signifikanten Problemen von Analytiker-zu-Analytiker und Untersuchung-zu-Untersuchung), schlechte Auflösung und beschränkte Genauigkeit und Linearität. Die CE bietet in Bezug auf Kosten, Präzision (viele Varianzkomponenten von Analytiker-zu-Analytiker und Untersuchung-zu-Untersuchung werden verringert), Linearität und einfache Handhabung Vorteile. Für den Analytiker bietet CE ein größeres Maß an Automatisierung, weniger „babysitting“ und einfachere Methodenentwicklung/Validierung. Welche Probleme treten bei dem Einsatz von CE für die Impfstoffanalytik auf? In den frühen Jahren hatte die CE einige Präzisionsprobleme, die ihr „Verständnis“ eingrenzte. Mit Beginn der modernen Instrumentierung (z.B. effiziente Temperatursteuerung) und Methoden (z.B. Einsatz von Migrationszeitstandards) verschwanden viele der Präzisionsprobleme. Die LC•GC Ausgabe in deutscher Sprache Juli 2009

LCGC ADS - Juli 2009
Inhaltsverzeichnis
Ein Neuartiges Verfahren Für Die Direkte Applikation Von Vollblut In Trenn- bzw. Detektionssysteme
LC-PROBLEMLÖSUNG Säulenpflege
Anwendung Der Kapillar-elektrophorese Zur Freigabe Und Charakterisierung Von Impfstoffen
HPLC–ELSD Troubleshooting
Produkte

LCGC ADS - July 2009